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蝗蟲基因組DNA提取及保存方法
時間:2018-05-23 10:01來源: 作者:秩名 點擊:
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1.供試昆蟲本試驗研究的昆蟲樣本為亞洲小車蝗（Oedaleusasiaticus）成蟲，均采自內蒙古錫林郭勒盟多倫縣農牧交錯區草原，用養蟲籠活體帶回實驗室進行處理保存。
2.液氮速凍處理取10頭活的亞洲小車蝗單頭裝入離心管中，將離心管放入液氮中速凍處理3min，取出后在室溫條件下放置12h觀察亞洲小車蝗存活情況。自增壓液氮罐
3.樣本保存方法
（1）液氮速凍后保存將采集帶回實驗室的活體蝗蟲樣本單頭裝入離心管中，將離心管放入液氮中速凍處理3min，取出后放入-40℃冰箱中保存備用。
（2）直接冷凍保存將采集帶回實驗室的活體蝗蟲樣本單頭裝入離心管中，直接放入-40℃冰箱中保存備用。
（3）乙醇保存將采集帶回實驗室的活體蝗蟲樣本放入無水乙醇（分析純）中保存備用。
（4）干制標本 將采集帶回來的活體亞洲小車蝗樣本放入毒瓶中毒死后，針插保存于標本室中，待風干后進行DNA提取試驗。
4.DNA的提取將上述4種方法保存的蝗蟲樣本在3個月后進行DNA提取試驗。分別選用單頭亞洲小車蝗的后足股節，無水乙醇（分析純）保存的蝗蟲后足股節需在提取之前先用無菌去離子水沖洗2～3次，將蝗蟲股節放入研缽中用液氮研磨成粉并移入1.5mL離心管中，然后使用天根dp304動物基因組DNA提取試劑盒參照說明書步驟進行基因組DNA提取。
5.DNA電泳檢測用1%的瓊脂糖凝膠電泳對提取的蝗蟲基因組DNA進行檢測。取DNA樣品3μL、上樣緩沖液2μL混勻后加入凝膠時預留的點樣孔中，加入DL2000Marker（TaKaRa；第3條帶為150ng/μL），經過100V恒壓電泳20min，使用紫外凝膠成像系統觀察基因組DNA提取情況并拍照保存。自增壓液氮罐
